PCR diagnostika infekcí přenášených klíšťaty

Komplexní krevní test, který využívá metodu polymerázové řetězové reakce (PCR) k identifikaci patogenů způsobujících boreliózu (Borrelie burgdorferi), lidská monocytární ehrlichióza (Ehrlichia chaffeensis) a lidská anaplazmóza (Anaplasma fagocytophilum).

Ruská synonyma

PCR diagnostika boreliózy, ehrlichiózy a anaplazmózy.

Anglická synonyma

Nemoci přenášené klíšťaty, polymerázová řetězová reakce, PCR, lymská borelióza, lidská ehrlichióza, lidská anaplazmóza.

Jaký biomateriál lze použít pro výzkum?

Jak se správně připravit na studium?

• 30 minut před studií nekuřte.

Obecné informace o studiu

Infekce přenášené klíšťaty představují vážný problém pro lidské zdraví. Nejvýznamnější infekce přenášené klíšťaty jsou:

• Lymeská borelióza (borelióza přenášená klíšťaty), původcem onemocnění je spirochéta Borrelia burgdorferi;
• Anaplazmóza, dříve známá jako granulocytární ehrlichióza, je způsobena α-proteobakterií Anaplasma phagocytophilum.

V obou případech jsou nositeli infekce klíšťata Ixodess capularis, I. ricinus, I. pacificus a I. persulcatus. V Rusku jsou nejvýznamnější druhy I. ricinus a I. persulcatus.

• monocytární ehrlichióza, původcem onemocnění je α-proteobakterium Ehrlichia chaffeensis. Přenašečem infekce je klíště ixodid Amblyomma americanum.

Infekce přenášené klíšťaty mají řadu společných vlastností:

• Klinický obraz infekcí přenášených klíšťaty má mnoho společných rysů a je nespecifický. Typicky se onemocnění projevuje jako syndrom podobný chřipce s horečkou, bolestmi hlavy, myalgií a artralgií. Pouze na základě klinického obrazu onemocnění je nemožné odlišit infekce přenášené klíšťaty od sebe navzájem a od jiných akutních infekčních onemocnění.
• Některá klíšťata ixodidů jsou infikována dvěma (výjimečně třemi) patogeny najednou (koinfekce) a u stejné osoby mohou vést ke vzniku kombinované infekce. Častěji jsou popisovány případy kombinované boreliózy a anaplazmózy.

Vzhledem k těmto rysům je v případě podezření na infekci přenášenou klíšťaty vyžadována komplexní laboratorní studie, včetně testů na všechny významné patogeny infekcí přenášených klíšťaty.

Pro laboratorní diagnostiku infekcí přenášených klíšťaty lze použít několik metod, včetně sérologických testů, analýzy obarveného krevního nátěru, bakteriologické kultivace, imunohistochemické analýzy a molekulárních diagnostických metod. Polymerázová řetězová reakce (PCR) je jednou z metod molekulární diagnostiky, která umožňuje detekci fragmentů genetického materiálu (DNA) infekčního agens v biologickém materiálu (například v krvi). Studie má oproti jiným metodám identifikace infekcí přenášených klíšťaty řadu výhod:

• Rychlost získání výsledků. PCR je dnes jednou z nejrychlejších metod identifikace patogenů. Díky tomu je metoda PCR považována za nejoptimálnější metodu pro diagnostiku akutní infekce.
• Vysoká citlivost metody. Další „rychlou“ metodou pro diagnostiku ehrlichiózy je Giemsovo barvení krevních nátěrů. Průkaz tzv. morul (shluků mikroorganismů uvnitř leukocytů) v krevních nátěrech je charakteristickým znakem ehrlichiózy a anaplazmózy. Morulae však nejsou vždy detekovány: pouze ve 3 % případů monocytární ehrlichiózy a 25–75 % případů anaplazmózy. Senzitivita PCR analýzy dosahuje 85 % pro E. chaffeensis a 90 % pro A. phagocytophilum, což umožňuje, aby byla PCR považována za nejpřesnější z rychlých metod diagnostiky infekcí přenášených klíšťaty.
• Vysoká specificita (60-85 %). Specifičnost metody je důležitá zejména pro diferenciální diagnostiku infekcí přenášených klíšťaty. Je známo, že například sérologické testy na infekce přenášené klíšťaty často dávají falešně pozitivní výsledky v důsledku přítomnosti zkřížených reakcí způsobených společnými antigenními vlastnostmi těchto mikroorganismů. Protože PCR používá primery specifické pro každý mikroorganismus, je pravděpodobnost falešně pozitivního výsledku mnohem nižší.

Je třeba si uvědomit omezení metody PCR:

• Protože reakce detekuje DNA ze živých i mrtvých mikroorganismů, není metoda PCR určena k hodnocení účinnosti léčby: výsledek zůstane pozitivní ještě nějakou dobu po zahájení účinné léčby.
• Senzitivita PCR závisí v menší míře na použití antibiotik než u jiných metod identifikace patogenů. Nejpřesnější výsledek však získá odběr vzorku biologického materiálu před zahájením léčby antibakteriálními léky.

Další laboratorní testy mohou také pomoci při diagnostice infekcí přenášených klíšťaty. Charakteristickým znakem ehrlichiózy je tedy pancytopenie a mírné zvýšení jaterních transamináz. V závažných případech onemocnění lze pozorovat hyponatrémii, hypokalcémii, hypomagnezémii, zvýšení kreatininu a urey a známky syndromu DIC.

Je třeba poznamenat, že klíšťata ixodid jsou také přenašeči viru klíšťové encefalitidy. V případě potřeby lze tento komplexní PCR test doplnit o test na virus klíšťové encefalitidy.

K čemu slouží výzkum?

• Pro diagnostiku boreliózy, monocytární ehrlichiózy a anaplazmózy.

Kdy je studium naplánováno?

• Pokud má pacient syndrom podobný chřipce (horečka, bolest hlavy, myalgie a artralgie) v kombinaci s indikací přisátí klíštěte;
• pokud jsou u pacienta s horečkou zjištěny laboratorní příznaky infekcí přenášených klíšťaty: pancytopenie, zvýšené hladiny jaterních transamináz.

Co znamenají výsledky?

Referenční hodnoty: negativní.

• borelióza (Borrelieburgdorferi), lidská monocytární ehrlichióza (Ehrlichiachaffeensis) a/nebo lidská anaplazmóza (Anaplasmafagocytophilum).

Důležité poznámky

• Studie není určena k hodnocení účinnosti léčby onemocnění.

Také doporučeno

Kdo si studium objedná?

Infekční specialista, terapeut, praktický lékař.

Literatura

1. Ismail N, Bloch KC, McBride JW. Lidská ehrlichióza a anaplazmóza. Clin Lab Med. březen 2010;30(1):261–92.
2. Swanson SJ, Neitzel D, Reed KD, Belongia EA. Koinfekce získané od klíšťat ixodů. Clin Microbiol Rev. říjen 2006;19(4):708-27.