POLYSACHARIDY OŘECHOVÝCH LISTŮ – Start in Science (vědecký časopis pro školáky)

Abstrakt vědeckého článku o základní medicíně, autor vědecké práce – Daironas Zhanna Vladimirovna, Kuleshova Svetlana Anatolyevna, Pshukova Irina Vasilievna

Jsou uvedeny informace o studiu složení listů vlašského ořechu (Juglans regia L.), rostoucích v okolí kavkazských minerálních vod, a vývoji suchého extraktu na jeho základě. Bylo zjištěno, že suchý extrakt z listů této rostliny má antioxidační aktivitu a je prakticky netoxickou látkou.

Podobná témata vědecké práce o základní medicíně, autorkou vědecké práce je Zhanna Vladimirovna Dayronas, Svetlana Anatolyevna Kuleshova, Irina Vasilievna Pshukova

Vývoj a standardizace léčivých bylinných přípravků z listů ořešáku

Studium složení biologicky aktivních látek suchých extraktů Echinacea angustifolia a Salvia officinalis

Vliv extraktu z listů ořešáku na kvalitu nealkoholických nápojů
Vlašské ořechy a metabolické poruchy (přehled literatury)
Vývoj a charakteristika nové bylinné kompozice granulí “Nephrofit”
i Nemůžete najít, co potřebujete? Vyzkoušejte službu výběru literatury.

Text vědecké práce na téma “Fytochemické studium ořechových listů jako zdroje antioxidačního činidla”

FYTOCHEMICKÁ STUDIE OŘECHOVÝCH LISTŮ JAKO ZDROJE ANTIOXIDANTU

© Zh.V. Dayronas, S.A. Kulešová, I.V. Pšuková

Pjatigorská státní farmaceutická akademie Ministerstva zdravotnictví Ruské federace, Kalinina Ave., 11, Pjatigorsk, 357532 (Rusko) e-mail: [email protected]

Jsou uvedeny informace o studiu složení listů vlašského ořechu (Juglans regia L.), rostoucích v okolí kavkazských minerálních vod, a vývoji suchého extraktu na jeho základě. Bylo zjištěno, že suchý extrakt z listů této rostliny má antioxidační aktivitu a je prakticky netoxickou látkou.

Klíčová slova: ořech, Juglans regia L., biologicky aktivní látky.

Ořech obecný (Juglans regia L.) patří do čeledi vlašských (Juglandaceae). Vlašské ořechy byly do Ruska dováženy více než v 9. století. zpět z Řecka. Postupně se usadil na Krymu a začal se široce pěstovat jako okrasná rostlina na severním Kavkaze, v Zakavkazsku, na Ukrajině a v Moldavsku.

Léčebné využití vlašských ořechů jako prastaré plodiny má dlouhou historii a využívaly se všechny části rostliny: plody, zelené oplodí, listy, kůra větví i kořeny. Listy ořešáku se používaly ve formě nálevů a odvarů při léčbě hnisavých a plísňových kožních lézí, plicních a jiných forem tuberkulózy, cukrovky, onemocnění ústní a krční sliznice, chudokrevnosti, nedostatku vitamínů aj. [1].

Chemické složení listů ořešáku je dobře prozkoumáno a je reprezentováno různými třídami sloučenin s hydrofilními vlastnostmi: vitamíny C, PP, taniny (deriváty pyrogalolu), flavonoidy (juglanin, avicularin, hyperosid, kvercetin 3-arabinosid, kaempferol 3-arabinosid ) [1, 2].

Experimentálně bylo zjištěno, že flavonoidy z listů mají hypotenzivní, antispasmodické a protizánětlivé účinky v experimentech na zvířatech [3].

V Rusku se listy ořešáku používají pouze v lidovém léčitelství a při použití v homeopatické praxi se odkazuje na regulační dokumenty cizích zemí. Zaměstnanci společnosti VILAR vyvinuli homeopatickou matricovou tinkturu ze sušených a čerstvých listů ořešáku, která je navržena ke standardizaci podle obsahu tříslovin (z hlediska kyseliny gallové), flavonoidů (z hlediska hyperosidu), naftochinonů (z hlediska juglonu) [4].

Cílem práce je fytochemická studie ořešákových listů na obsah různých tříd biologicky aktivních látek (BAC) a posouzení toxicko-farmakologických vlastností alkoholového extraktu.

Jako výchozí surovina byly použity ořechové listy sklizené v okolí kavkazských minerálních vod v červnu, kdy ještě nedosáhly definitivního vývoje a voněly balzamikem. Při přípravě surovin se oddělovaly jednoduché listy od středového řapíku.

Ke studiu složení fenolických sloučenin byla použita chromatografická metoda. 5,0 g suchých ořechových listů, rozdrcených na velikost částic 1-2 mm, bylo extrahováno 70% ethylalkoholem až do úplného vyčerpání surovin. Spojené extrakty byly odpařeny ve vakuu na vodný zbytek, ochlazeny a zfiltrovány. Filtrát byl použit pro extrakci kapalina-kapalina organickými rozpouštědly: ethylacetátem

* Autor, se kterým si dopisovat.

Tatom a butanol-1. Vodný zbytek extraktů alkohol-voda byl převeden do dělicí nálevky a protřepán se stejnými objemy chloroformu. Po oddělení vrstev bylo odděleno organické rozpouštědlo. Tento postup byl proveden 7-8 krát, chloroformové extrakty byly spojeny. Po extrakci chloroformem se vodný zbytek zahříval ve vodní lázni, aby se odstranil chloroform, ochladil se a reagoval s ethylacetátem. Vodný zbytek získaný extrakcí ethylacetátem byl zahříván ve vodní lázni k odstranění posledně jmenovaného, ​​ochlazen a zpracován 1-butanolem. Extrakty byly odpařeny ve vakuu na pryskyřičný zbytek a použity pro chromatografickou analýzu.

Přítomnost flavonoidů a fenolkarboxylových kyselin byla stanovena v ethylacetátových frakcích a vodném zbytku extraktu z listů ořešáku pomocí charakteristických kvalitativních reakcí. Ethylacetátová frakce byla chromatografována na papíře s následným použitím specifických činidel pro vývoj flavonoidů. Chromatogramy byly prohlíženy pod UV světlem před a po ošetření chromogenními činidly [2, 5, 6].

Ve vodných extraktech surovin byly pomocí tenkovrstvé chromatografie na BIi/o1 plotnách stanoveny organické kyseliny a aminokyseliny a byla provedena kvalitativní analýza saponinů, taninů a sacharidů [7].

Listy ořešáku byly hodnoceny na kvantitativní obsah BAS [8-10].

Pro nalezení optimálních podmínek pro získání tekutého extraktu z listů ořešáku byly stanoveny absorpční koeficienty surovin, zvolen optimální stupeň mletí surovin a doba extrakce. Kvalita tekutého extraktu byla regulována podle požadavků 50. vydání Globálního fondu na obsah sušiny, těžkých kovů, alkoholu a vlhkosti a množství triterpenových saponinů v přepočtu na kyselinu ursolovou. Z kapalného extraktu byl získán suchý extrakt odstraněním extrakčního činidla ve vakuové sušárně při teplotě 65-XNUMX °C.

Tabulka 1. Výsledky identifikace biologicky aktivních látek v listech ořešáku pomocí chromatografie

Stanovená třída BAS Systém rozpouštědel Výsledek detekce

Flavonoidy 30% kyselina octová, páry amoniaku, lihový roztok hydroxidu draselného, ​​2% methanolový roztok chloroxidu zirkoničitého Svítivé skvrny žluté, tmavě žluté, zelené, oranžové, hnědožluté a tmavě hnědé barvy

Fenolkarboxylové kyseliny 2% kyselina octová, páry amoniaku, 0,5% alkoholový roztok bromokresolové zeleně, 1% alkoholový roztok chloridu železitého, diazotovaný p-nitroanilin Záře zelenomodrých skvrn

Organická směs 95% lihu 0,1% lihu roztok bromu – jasně žluté skvrny

ethylkyselina a koncentrovaný roztok amoniaku (16:4,5) kresolová zeleň na modrém pozadí

Aminokyseliny n-butanol-kyselina mravenčí-voda (4:1:1) 2% alkoholový roztok ninhydrinu modrofialové a červenofialové skvrny

Tabulka 2. Kvantitativní obsah biologicky aktivních sloučenin v listech ořešáku

Třída BAS Zjištěno v průměru, X, % Metoda kvantitativního stanovení Metrologické charakteristiky

Flavonoidy 1,73 Diferenciální 0,0276 0,0113 0,0289 1,67

(pro kvercetin) spektrofotometrie

Organická 3,44 titrimetrie 0,0283 0,0115 0,0297 0,86

kyseliny (pro kyselinu jablečnou)

Askorbová 0,33 Titrimetrie 0,0041 0,0017 0,0043 1,30

Činění 3,81 Titrimetrie 0,0344 0,0141 0,0361 0,95

Polysacharidy 1,67 Gravimetrie 0,0105 0,0043 0,0110 0,66

Saponiny 4,7 Spektrofotometrie 0,0579 0,0236 0,0607 1,29

(pro kyselinu ursolovou)

Studium některých farmakologických vlastností suchého extraktu z listů ořešáku. Experimenty byly prováděny in vivo na bílých myších a in vitro za použití standardních metod [11, 12, 13]. Byla studována akutní toxicita a antioxidační aktivita suchého extraktu z listů ořešáku.

Akutní toxicita byla studována Körberovou metodou. Stav myší byl pozorován po dobu dvou týdnů [12]. Přežití zvířat je uvedeno v tabulce 3.

Studovaný suchý extrakt z listů vlašských ořechů je tedy bezpečným prostředkem a může být klasifikován jako toxicita třídy 4.

Antioxidační aktivita (AOA) suchého extraktu z listů ořešáku byla studována pomocí metody založené na schopnosti polynenasycených mastných kyselin (PUFA) tvořit produkty peroxidace lipidů (LPO) pod vlivem atmosférického kyslíku, které reagují s kyselinou thiobarbiturovou za vzniku červená barva. AOA byla hodnocena jako procento na základě stupně zbarvení vzhledem ke kontrole. Srovnávacím lékem byl dibunol.

Experimenty in vitro ukázaly, že suchý extrakt z listů ořešáku v dávce 50 mg/l snižuje množství produktů peroxidace lipidů v inkubační směsi o 27,6 %, v dávce 200 mg/l o 60,8 % ve srovnání s kontrolou ( Tabulka 4). Zvýšení dávky extraktu (400 mg/l nebo více) nevede k dalšímu poklesu barvy. Ve vztahu k dibunolu suchý extrakt z listů ořešáku v dávkách 200, 400 mg/l výrazně snižuje tvorbu produktů peroxidace lipidů o 21,6 %.

Suchý extrakt z listů ořešáku má tedy antioxidační účinek.

Tabulka 3. Stanovení LB50 suchého extraktu z listů ořešáku (n=6)

Dávka, mg/kg 5000 5500 6000 6500 7000

Přežil 6 5 3 1 0

Úmrtí 0 1 3 5 6

D 500 500 500 500

500 1000 1000 500 DZ

LD50 = LD100-XDZ/n= 7000-3000/6 = 6500 mg/kg.

Tabulka 4. Studie antioxidační aktivity suchého extraktu z listů ořešáku

Testovaný objekt Extinkce, X (532 nm) D % ke kontrole D % k dibunolu

Kontrola (voda) 0,250±0,001 — —

Suchý extrakt z listů ořešáku 50 mg/l 200 mg/l 400 mg/l 0,181±0,001*# 0,098±0,001*# 0,098±0,001*# -27,6 -60,8 -60,8 +44,8 -21,6

Dibunol 350 mg/l 0,125±0,001* -50,0 —

Poznámka: * změny jsou spolehlivé ve vztahu k ovládání, str

Výsledkem výzkumu bylo zjištěno, že listy ořešáku (Juglans regia L.), rostoucí na severním Kavkaze, obsahují fenolické sloučeniny: flavonoidy, fenolkarboxylové kyseliny, třísloviny. Chromatograficky byla prokázána přítomnost minimálně 5 flavonoidů (kvercetin, kempferol, hyperosid) a 3-fenol-karboxylových kyselin (ve spolehlivých vzorcích byly identifikovány kyseliny kofeinové a galové) v listech rostliny.

Bylo zjištěno, že listy ořešáku obsahují také organické kyseliny (citronová, jantarová, jablečná, askorbová), polysacharidy a saponiny.

Nejvyšší výtěžnost extraktivních látek z listů je pozorována při použití 50% etylalkoholu (32,7%), s vlhkostí suroviny 10,5%, celkovým popelem – 10,3%, popelem nerozpustným v 10% HCl – 0,86%.

Suchý extrakt, který jsme získali, je tmavě hnědý prášek, svíravý v chuti, obsah vlhkosti – 2,9 %, triterpenové saponiny – 11,2 %. Obsah těžkých kovů splňuje požadavky Státního fondu XI.

Suchý extrakt z listů ořešáku patří k látkám 4. třídy toxicity, tzn. je pro člověka prakticky bezpečný. Farmakologické studie prokázaly, že studovaný extrakt má výraznou antioxidační aktivitu.

1. Byl proveden fytochemický rozbor listů ořešáku, zjištěn obsah hlavního BAS.

2. Na základě navržených surovin byl vyvinut suchý extrakt, který má antioxidační aktivitu a je bezpečným lékem.

1. Rostlinné zdroje SSSR: Kvetoucí rostliny, jejich chemické složení, využití. Čeleď Magnoliaceae-Limoniaceae. L., 1984. 460 s.

2. Bandyukova V.A., Oganesyan E.T., Lisevetskaya L.I., Sidelnikova V.I., Shinkarenko A.L. Některé výsledky studia chemického složení rostlin na severním Kavkaze // Fenolické sloučeniny a jejich biologické funkce. M., 1968. S. 95-100.

3. Shinkarenko A.L., Sokolov S.D., Dorodneva V.I. Chemické a farmakologické studium flavonoidních komplexů z ořešáku a listů ořešáku černého // Problematika balneologie, farmacie, farmakologie. Pjatigorsk, 1967. s. 365-366.

4. Enikeeva R.A. Studie o farmakognostickém studiu a standardizaci surovin a přípravků z vlašského ořechu (Juglans regia L.): abstrakt. dis. . Ph.D. farmaceutický Sci. M., 2008. 21 s.

5. Bandyukova V.A., Shinkarenko A.L., Kazakov A.L. Metody studia přírodních flavonoidů. Pjatigorsk, 1977. 72 s.

6. Bandyuková V.A. Rostlinné fenolové kyseliny, jejich estery a glykosidy // Chemie přírodních sloučenin. 1983. č. 3. s. 263-273.

7. Chemický rozbor léčivých rostlin / ed. N.I. Grinkevič, L.N. Safronovič. M., 1983. 176 s.

8. Gorbunova T.A., Dargaeva T.D. Standardizace suché šťávy Kalanchoe // Zdroj a fytochemická studie léčivé flóry SSSR. M., 1991. S. 190-195.

9. Belikov V.V., Shreiber M.S. Metody pro analýzu flavonoidních sloučenin // Farmacie. 1970. č. 1. s. 68-72.

10. Státní lékopis SSSR. Obecné metody analýzy. Léčivé rostlinné suroviny. 11. vyd. M., 1989. Vydání. 2. 400 s

11. Blagorodov S.G., Shepelev A.P., Dmitrievskaya N.A., Chernovskaya L.N., Koblik A.V., Suzdalev K.F., Kholodova N.V., Kuznetsov E.V., Bren Sh.V., Tskhadadze K.A., Bren V.A. Metodika stanovení antioxidační aktivity chemických sloučenin // Chemical-Pharmaceutical Journal. 1987. č. 3. s. 292-294.

12. Sernov L.N., Gatsura V.V. Základy experimentální farmakologie. M., 2000. 352 s.

13. Fisenko V.P. Pokyny pro experimentální (preklinické) studium nových farmakologických látek. M., 2000. s. 114-119.

Přijato 18. června 2009

Adzhiakhmetova S.L. (Pyatigorsk, Pyatigorsk Medical and Pharmaceutical Institute – pobočka Volžské státní lékařské univerzity Ministerstva zdravotnictví Ruska)

1. Kochetkov N.K. Chemie biologicky aktivních sloučenin / N.K. Kočetkov. – M., 1970. – 631 s.

2. Ovodov Yu.S. Moderní představy o pektinových látkách / Yu.S. Ovodov // Bioorgan, chemie. – 2009. – T. 35, č. 3. – S. 293-310.

3. Polysacharidy Fabaceae V. β-glukan z kořenů Sophora flavescens KOŘENY / D.N. Olennikov [et al.] // Chemie přírodních sloučenin. – 2011. – č. 1. – S. 47.

Léky vyrobené z rostlinných materiálů mají nízkou toxicitu a vysokou biologickou aktivitu a jsou široce používány v domácí farmaceutické praxi, jejíž sortiment tvoří asi 40 % z celkového počtu používaných léků. Mezi tyto objekty patří ořešák vlašský (Juglans regia L.) z čeledi vlašské (Juglandaceae). Listové mladé výhonky s květy ořešáku jsou široce používány v lidovém i oficiálním lékařství v zahraničí jako protizánětlivé, hojivé a antimikrobiální činidlo. Ořešák má širokou pěstitelskou oblast.

Obstarávání surovin je nákladově efektivní a pracně náročný proces. Proces izolace pektinu je prostý technologické náročnosti. Pektin má aktivní komplexotvornou schopnost s ohledem na radioaktivní kobalt, stroncium, cesium, zirkonium, ruthenium, yttrium a další kovy. Během procesu trávení se pektin mění na kyselinu pektinovou, která se spojuje s těžkými kovy a radionuklidy a tvoří nerozpustné soli, které jsou přirozeně vylučovány z těla. Při jeho neustálém užívání nedochází k hromadění škodlivých látek v těle [1, 3]. Kombinace široké škály farmakologických vlastností, stejně jako absence toxických účinků na organismus, otevírá široké možnosti využití pektinového komplexu izolovaného z listů ořechu.

Účelem této práce bylo izolovat polysacharidový komplex z listů ořešáku a identifikovat jeho monosacharidové složení.

Předmětem studie byly listy ořešáku sesbírané v červenci až srpnu 2014. Suroviny byly sušeny ve stínu, rozdrceny a prosévány přes síto o průměru otvoru 5 mm.

Izolace polysacharidů do frakcí: I – WPPS (vodou rozpustné polysacharidy), II – PV (pektinové látky), III – Hz A (hemicelulóza A) a IV – Hz B (hemicelulóza B) z listů ořešáku byla provedena podle metoda N.K. Kochetková a M. Sinnera [1].

Izolace VPPS: surovina byla extrahována vodou při teplotě místnosti a za stálého míchání po dobu 24 hodin (poměr suroviny k extrakčnímu činidlu je 1:15). Výsledný extrakt byl zfiltrován a polysacharidy z filtrátu byly vysráženy dvojnásobným objemem 95% ethylalkoholu. Směs vody a alkoholu byla poté odstřeďována po dobu 15 minut při rychlosti otáčení 3000 ot./min. Sraženina byla kvantitativně přenesena do odpařovací misky a vysušena v exsikátoru do konstantní hmotnosti.

Izolace PV: zbývající moučka po izolaci VPPS byla extrahována ve vodní lázni při 100 °C a za stálého míchání po dobu jedné hodiny směsí 0,5% roztoku šťavelanu amonného a 0,5% roztoku kyseliny šťavelové (1:1). Dále byl extrakt zfiltrován přes několik vrstev gázy a byl přidán jeden objem 95% ethylalkoholu pro vysrážení PV. Sraženina byla oddělena centrifugací za stejných podmínek a sraženina byla vysušena v exsikátoru.

Izolace Hz A: jídlo zbývající po izolaci PV bylo ošetřeno 7% roztokem hydroxidu sodného po dobu 17 hodin. Extrakt byl zfiltrován přes několik vrstev gázy a upraven na pH 6-7 pomocí ledové kyseliny octové, vytvořila se sraženina, Hz A. Dále byla odstředěna a sraženina byla přenesena do odpařovací misky a vysušena do konstantní hmotnosti.

Izolace Hz B: supernatant po izolaci Hz A byl dialyzován přes semipermeabilní membránu proti vodě po dobu 18 hodin. Zbývající kapalina byla převedena do baňky s plochým dnem a ošetřena dvojnásobným objemem 95% ethylalkoholu. Oddělená sraženina Hz B byla oddělena odstředěním jak je popsáno výše a vysušena do konstantní hmotnosti [2].

Pro stanovení monosacharidového složení izolovaných frakcí byla provedena hydrolýza 2N kyselinou sírovou při 100 °C po dobu 10 hodin pro ve vodě rozpustné polysacharidy a po dobu 48 hodin pro zbývající polysacharidové komplexy. Hydrolyzát byl neutralizován uhličitanem barnatým za použití univerzálního indikátoru do neutrální reakce, zfiltrován, odpařen ve vodní lázni na malý zbytek a chromatografován. Monosacharidy po kyselé hydrolýze byly identifikovány vzestupnou papírovou chromatografií porovnáním se spolehlivými svědeckými vzorky. Chromatogramy byly vysušeny na vzduchu a ošetřeny anilinftalátovým činidlem, následovalo zahřívání v sušárně při teplotě 100-110 °C po dobu 15-20 minut. Na chromatogramu byl pozorován výskyt monosacharidových skvrn různých barev [1, 2]. Souhrnná data týkající se polysacharidového komplexu jsou uvedena v tabulce.

Kvalitativní a kvantitativní složení polysacharidů z listů vlašského ořechu (Juglans regia)

Zjištěné monosacharidy po hydrolýze